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病毒采樣管保存液主要有兩種

2021年07月10日

市場上廣泛使用的病毒采血管保存液主要有兩種,一種是以運送培養基為基礎改良的病毒維持液,另一種則為核酸提取裂解液改良的保存液。

前者的主要成分是Eagle's基礎培養液(MEM)或Hank's平衡鹽,添加了病毒生存所需的鹽類、氨基酸、維生素、葡萄糖以及蛋白質,這種保存液使用酚紅鈉鹽做為指示劑,溶液pH值在6.6-8.0時溶液呈粉紅色。保存液中添加了必須的葡萄糖、L-谷氨酰胺和蛋白質,蛋白質的提供形式有胎牛血清或牛血清白蛋白,可以穩定病毒的蛋白質外殼。由于保存液營養成分豐富,有利于病毒的成活但是也有利于細菌的生長,如果保存液中污染了細菌,則會大量繁殖,其代謝產物中的二氧化碳會使保存液pH值下降,從粉紅色變為黃色。因而大多數廠家都在配方中添加了抑菌劑成分,推薦使用的抑菌劑為青霉素、鏈霉素、慶大霉素及多粘菌素B等,不推薦使用疊氮鈉、2-甲基-4-異噻唑啉-3-酮(MCI)和 5-氯-2-甲基-4-異噻唑啉-3-酮(CMCI)等抑制劑,因為這些組分對PCR反應有影響。由于這種保存液提供的樣本基本是活病毒,可以最大程度保持樣本的原始性,后續不僅可以用于病毒的核酸提取檢測,還能用于病毒的培養和分離。但是用于檢測時應該注意的是必須滅活以后再進行核酸提取純化。

另一種以核酸提取裂解液為基礎配制的保存液,主要成分為平衡鹽類、EDTA螯合劑、胍鹽(如異硫氰酸胍、鹽酸胍等)、陰離子表面活性劑(如十二烷基硫酸鈉)、陽離子表面活性劑(如十四烷基三甲基草酸銨)、苯酚、8-羥基喹啉、二硫蘇糖醇(DTT)、蛋白酶K等幾種或多種組分,這種保存液是直接裂解病毒釋放核酸,消除核酸分解酶(RNase),如果僅用于RT-PCR較為合適,但裂解液可以滅活病毒,這種樣本不能用于病毒的培養分離。

病毒采血管保存液使用的金屬離子螯合劑推薦使用EDTA鹽類(如乙二胺四乙酸二鉀、乙二胺四乙酸二鈉等),不推薦使用肝素類(如肝素鈉、肝素鋰),以免影響PCR檢測。


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